2020年版無菌檢查法第二次征求意見稿
解析

閱讀tips：紅色劃線部分為刪減內(nèi)容，藍(lán)色部分為增補(bǔ)修訂內(nèi)容。

1、 培養(yǎng)基可按以下處方制備，亦可使用按該處方生產(chǎn)的符合規(guī)定的脫水培養(yǎng)基或成品培養(yǎng)基。配制后應(yīng)采用驗證合格的滅菌程序滅菌。制備好的培養(yǎng)基應(yīng)保存在2～25℃、避光的環(huán)境，若保存于非密閉容器中，一般在3周內(nèi)使用；若保存于密閉容器中，一般可在一年內(nèi)使用若不即時使用，應(yīng)置于無菌密閉容器中，在 2～25℃、避光的環(huán)境下保存，并在經(jīng)驗證的保存期內(nèi)使用。
解讀：密閉容器的理解，應(yīng)該是無菌屏障的概念。針對臨用新配的培養(yǎng)基，可使用非密閉容器（如傳統(tǒng)的三角錐形瓶）；針對不即時使用的培養(yǎng)基，要求使用目前已經(jīng)慢慢普及的密封瓶（如藍(lán)蓋螺旋密封瓶）密閉保存，且有效期需要經(jīng)過企業(yè)自己的驗證。對于滅菌F0≥8或者過度滅菌的培養(yǎng)基才有有效期驗證的必要，對于115℃滅菌或者煮沸滅菌的培養(yǎng)基還是建議現(xiàn)配現(xiàn)用。

2、0.5%葡萄糖肉湯培養(yǎng)基（用于硫酸鏈霉素等抗生素的無菌檢查）的刪除.
解讀：這個培養(yǎng)基出現(xiàn)在硫酸鏈霉素和硫酸卡那霉素的各論中，采用的是直接接種法，且按照該法無法通過藥典的適用性檢查。故刪除。

3、接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至沙氏葡萄糖瓊脂斜面培養(yǎng)基上，20～25℃培養(yǎng)5～7天，或直到獲得豐富的孢子，加入3～5ml含0.05％（ml/ml）聚山梨酯80的pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9%無菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫
解讀：明確黑曲霉培養(yǎng)的zui終目的-獲得豐富的孢子，可以理解如果生長良好，培養(yǎng)少于5天或多于7天都是允許的，這也是考慮在實際操作過程中，孢子的生長狀態(tài)受原始菌株、培養(yǎng)基、培養(yǎng)箱環(huán)境等的影響。例如小編在使用不同廠家培養(yǎng)基（進(jìn)口和國產(chǎn)）培養(yǎng)黑曲霉時，孢子的生長狀況是有很大的差別。
 
4、取每管適宜裝量為9ml的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基7支,分別接種小于不大于100cfu的枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接種作為空白對照，培養(yǎng)不超過5天。逐日觀察結(jié)果。
解讀：在USP40中提到了面積/深度比的概念。在培養(yǎng)基靈敏度檢查培養(yǎng)基接種中，取消FTM和TSB每管體積的要求，因為考慮到了目前市售的不同廠家、規(guī)格的成品培養(yǎng)基的情況。取消逐日觀察，更符合實際操作。
 
5、水溶性供試液過濾前，一般應(yīng)先將少量的沖洗液過濾，以潤濕濾膜。
解析：預(yù)先潤洗膜可使膜首先達(dá)到吸附平衡，減少對供試液的吸附。提前潤洗濾膜，不要小瞧這步，有研究表明提前潤洗后殘留量可以相差3倍。
 
6、供試液經(jīng)薄膜過濾后，若需要用沖洗液沖洗濾膜，每張濾膜每次沖洗量一般為100ml，且總沖洗量一般不超過500ml，zui高不得超過1000ml，以避免濾膜上的微生物受損傷。
解析：去除抑菌性的常用手段，首先選擇合適的中和劑，用了適合的中和劑可以提高方法的可重復(fù)性，USP40中的總沖洗量不超過500m。不過在《中國藥典分析檢測技術(shù)指南》總沖洗量還是控制在1000ml。